Cuantificación de proteínas ácidas fibrilares gliales en sangre utilizando un ensayo microfluídico de segunda generación. Validación y análisis comparativo con dos ensayos establecidos

OBJETIVOS: Se han identificado niveles elevados de la proteína ácida fibrilar glial (GFAP) en sangre como un biomarcador valioso para algunos trastornos neurológicos, como la enfermedad de Alzheimer y la esclerosis múltiple. Sin embargo, la mayoría de las cuantificaciones de GFAP en sangre hasta ahora se realizaron utilizando el mismo ensayo basado en microperlas, y hasta la fecha falta una aplicación clínica rutinaria. MÉTODOS: En este estudio, validamos un novedoso ensayo Ella de segunda generación (2ª gen) para cuantificar GFAP en suero. Además, comparamos su desempeño con un array de molécula única basado en microperlas (Simoa) y un ensayo casero de GFAP en una cohorte clínica de enfermedades neurológicas, incluyendo 210 pacientes. RESULTADOS: Los experimentos de validación resultaron en una variación intraensayo del 10 %, una interensayo del 12 %, un límite de detección de 0.9 pg/mL, un límite inferior de cuantificación de 2.8 pg/mL, y menos del 20 % de variación en muestras de suero expuestas a hasta cinco ciclos de congelación-descongelación, 120 h a 4 °C y temperatura ambiente. La medición de la cohorte clínica utilizando todos los ensayos reveló el mismo patrón de distribución de GFAP en los diferentes grupos diagnósticos. Además, observamos una fuerte correlación entre el ensayo Ella de 2ª gen y Simoa (r=0.91 (IC 95 %: 0.88-0.93), p<0.0001) y el ensayo inmunológico casero (r=0.77 (IC 95 %: 0.70-0.82), p<0.0001). CONCLUSIONES: Nuestros resultados demuestran una alta fiabilidad, precisión y reproducibilidad del ensayo Ella de 2ª gen. Aunque se observó una mayor sensibilidad del ensayo para Simoa, el nuevo ensayo microfluídico podría tener el potencial de ser utilizado para el análisis de GFAP en trabajos clínicos diarios debido a su robustez y facilidad de uso.