Evaluación interlaboratorial de ensayos de PCR de Mucorales para la prueba de muestras de suero: Un estudio de la Iniciativa de PCR fúngico y el grupo de estudio Modimucor

Se desarrollaron evaluaciones interlaboratoriales de ensayos de qPCR de Mucorales para evaluar la reproducibilidad y el rendimiento de los métodos actualmente utilizados. Los participantes incluyeron 12 laboratorios de hospitales universitarios franceses (nueve de ellos participaron en el estudio Modimucor) y 11 laboratorios que participaron en la Iniciativa de PCR fúngico. Para el panel 1, se añadieron muestras de ADN de tres especies diferentes (Rhizomucor pusillus, Lichtheimia corymbifera, Rhizopus oryzae) a tres sueros. Para el panel 2, se prepararon seis sueros con tres concentraciones de R. pusillus y L. corymbifera (1, 10 y 100 genomas/ml). Cada panel incluía un suero de control negativo ciego. Se distribuyó un formulario con cada panel para recoger resultados e información técnica necesaria, incluyendo el método de extracción de ADN, el volumen de muestra utilizado, el volumen de elución de ADN, el método de qPCR, el volumen de entrada de la plantilla de qPCR, el volumen total de la reacción de qPCR, la plataforma de qPCR y los reactivos de qPCR utilizados. Para el panel 1, evaluando 18 protocolos diferentes, los resultados cualitativos (positivos o negativos) fueron correctos en el 97% de los casos (70/72). Se observó una variabilidad interlaboratorial muy baja en los valores de Cq (SD = 1.89 ciclos). Para el panel 2, evaluando 26 protocolos diferentes, las tasas de detección fueron altas (77-100%) para 5/6 de los sueros espikeados. Hubo una asociación significativa entre la plataforma de qPCR y el rendimiento. Sin embargo, ciertos pasos técnicos y combinaciones óptimas de factores también pueden afectar el rendimiento. La buena reproducibilidad y rendimiento demostrados en este estudio respaldan el uso de qPCR de Mucorales como parte de la estrategia diagnóstica para la mucormicosis.