Mutagénesis dirigida en pollos utilizando el sistema CRISPR/Cas9

El sistema CRISPR/Cas9 es una herramienta simple y poderosa para la edición del genoma en varios organismos, incluidos los animales de granja. Sin embargo, el sistema no se ha aplicado en aves de corral debido a la dificultad de acceder a sus cigotos. Aquí informamos sobre la implementación de la orientación genética mediada por CRISPR/Cas9 en pollos. Dos genes de la clara de huevo, ovalbumina y ovomucoide, fueron mutagenizados de manera eficiente (>90%) en células germinales primordiales (PGCs) de pollos cultivadas mediante la transfección de plásmidos circulares que codifican Cas9, un ARN guía único y un gen que codifica resistencia a fármacos, seguido de una selección temporal con antibióticos. Trasplantamos PGCs mutantes de ovomucoide inducidas por CRISPR en embriones de pollo receptores y establecimos tres gallos quiméricos de línea germinal (G0). Todos los gallos tenían espermatozoides mutantes de ovomucoide derivados del donante, y los dos con una alta tasa de transmisión de gametos derivados del donante produjeron pollos mutantes heterocigotos de ovomucoide en aproximadamente la mitad de su descendencia derivada del donante en la siguiente generación (G1). Además, generamos descendencia mutante homocigota de ovomucoide (G2) cruzando los pollos mutantes G1. En conjunto, estos resultados demuestran que el sistema CRISPR/Cas9 es un método simple y efectivo de orientación genética en pollos.