Mapeo de epítopos de alta resolución de las interacciones hGH-receptor mediante mutagénesis de barrido de alanina

Se utilizó una estrategia, denominada mutagénesis de barrido de alanina, para identificar cadenas laterales específicas en la hormona de crecimiento humana (hGH) que modulan fuertemente la unión al receptor de hGH clonado a partir de hígado humano. Se introdujeron mutaciones puntuales a alanina (62 en total) en cada residuo contenido dentro de los tres segmentos discontinuos de la hGH (residuos 2 a 19, 54 a 74 y 167 a 191) implicados en el reconocimiento del receptor. El barrido de alanina reveló un grupo de una docena de cadenas laterales grandes que, al mutarse a alanina, mostraron individualmente una afinidad de unión más de cuatro veces menor al receptor de hGH. Muchos de estos residuos que promueven la unión al receptor de hGH están alterados en homólogos de la hGH (como los lactógenos placentarios y las prolactinas) que no se unen firmemente al receptor de hGH. El plegamiento global de estas proteínas mutantes fue indistinguible del de la hGH de tipo salvaje, según se determinó mediante una fuerte reactividad cruzada con siete anticuerpos monoclonales conformacionalmente sensibles diferentes. El barrido de alanina también identificó al menos una cadena lateral, Glu174, que dificultaba la unión, ya que cuando se mutó a alanina la afinidad por el receptor aumentó en más de un factor de cuatro.