Tolerancia a mutaciones y modificaciones químicas en un siRNA

El RNA interferente corto (siRNA), el agente activo de la interferencia del RNA, muestra promesas de convertirse en una herramienta valiosa tanto en la investigación básica como clínica. Exploramos la tolerancia a mutaciones y modificaciones químicas en varias partes de las dos hebras de 21-nt de un siRNA que tiene como objetivo el iniciador de la coagulación sanguínea, el Factor Tisular. Las mutaciones fueron transversiones G/C. Las modificaciones químicas fueron 2'-O-metilación, 2'-O-alilación y fosforotioatos. Encontramos que el siRNA generalmente toleraba mutaciones en el extremo 5', mientras que el extremo 3' exhibió baja tolerancia. Esta observación puede facilitar el diseño de siRNA para la orientación específica de transcritos que contienen polimorfismos de un solo nucleótido. Además, demostramos que en nuestro sistema, la hebra antisentido única del siRNA tipo salvaje es casi tan efectiva como el dúplex de siRNA, mientras que la versión correspondiente metilada M2+4 del antisentido tenía actividad reducida. La mayoría de las versiones químicamente modificadas que se probaron tuvieron una actividad inicial casi tipo salvaje, mientras que la actividad a largo plazo se incrementó para ciertas especies de siRNA. Nuestros resultados pueden mejorar el diseño de siRNAs para experimentos in vivo.