Desarrollo de plásmidos que se replican de manera autónoma para Candida albicans.

Se utilizó un conjunto de fragmentos RsaI de Candida albicans clonados en un vector que contiene secuencias de pBR322 y el gen ADE2 de Candida para transformar un mutante ade2 de Candida a protonotrofía de adenina. Se identificó una secuencia potencialmente replicante de forma autónoma (ARS) en el ADN de Candida mediante dos criterios: inestabilidad del marcador seleccionable en ausencia de selección y la presencia de plásmido libre en preparaciones de ADN total. Los plásmidos portadores del ARS transformaron C. albicans a una alta frecuencia (200 a 1,000 transformantes ADE+ por microgramo de ADN), y el análisis de hibridación de Southern de estos transformantes indicó que estaban presentes múltiples copias de las secuencias del plásmido y que, aunque estaban presentes en moléculas de alto peso molecular, estas secuencias no habían sufrido reordenamiento. La electroforesis en gel de alteración de campo ortogonal indicó que las secuencias transformantes de alto peso molecular no estaban asociadas a ningún cromosoma. La interpretación más simple para explicar estos datos es que las secuencias transformantes están presentes como oligómeros que consisten en repeticiones en tándem de cabeza a cola. Las cepas transformadas ocasionalmente producen segregantes estables en los que las secuencias transformantes están integradas en el cromosoma como repeticiones. La secuencia de Candida responsable del fenotipo ARS se limitó a un único fragmento de RsaI de 0.35 kilobases que está presente en una copia por genoma haploide.