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La vasopresina (VP) estimula una cascada de señalización que resulta en la fosforilación y acumulación en la membrana apical de la acuaporina-2 (AQP2), lo que conduce a la reabsorción de agua por los conductos colectores del riñón. Sin embargo, los roles de la mayoría de los eventos de fosforilación en el extremo C en el reciclaje AQP2 estimulado y constitutivo no se comprenden completamente. Aquí, generamos células LLC-PK1 que contienen mutaciones puntuales de todos los sitios de fosforilación potencial en el extremo C de AQP2: S226, S229, T244, S256, S261, S264 y S269, para determinar su impacto en el tráfico de AQP2. Producimos un constructo AQP2 All Null en el que estos residuos de serina (S) o treonina (T) fueron mutados a alanina (A) o glicina (G), y luego reintrodujimos el mimético de fosforilación, ácido aspártico (D), individualmente a cada sitio en el mutante All Null. Como se esperaba, el mutante All Null no se acumula en la membrana plasmática en respuesta a la VP, pero aún así pasa por un reciclaje constitutivo, como se demuestra por su acumulación en la membrana cuando la endocitosis es bloqueada por metil-β-ciclodextrina (MβCD), y acumulación en un parche perinuclear a baja temperatura (20°C). Los miméticos de fosforilación única S226D, S229D, T244D, S261D, S264D y S269D fueron insuficientes para causar acumulación en la membrana de AQP2 solo o después del tratamiento con VP. Sin embargo, AQP2 S256 reintroducido en el mutante All Null mantiene su respuesta de tráfico a la VP. Concluimos que 1) el reciclaje constitutivo de AQP2 no requiere fosforilación en sitios C-terminales; 2) la "fosforilación" forzada de sitios en el extremo C de AQP2 es insuficiente para estimular la acumulación en la membrana en ausencia de la fosforilación de S256; y 3) la fosforilación de S256 por sí sola es necesaria y suficiente para causar la acumulación de AQP2 en la membrana.
Arthur et al. (Wed,) estudiaron esta cuestión.