Cinéticas de la interacción de gelsolina con F-actina estabilizada por faloidina. Constantes de velocidad para la unión y el corte

Se han investigado las cinéticas de la interacción de la gelsolina con filamentos de actina utilizando dos sondas fluorescentes, faloidina marcada con isotiocianato de tetrametilrhodamina unida a F-actina y actina marcada con N-(1-pirenil)iodoacetamida. También hemos analizado el corte de F-actina por gelsolina utilizando un ensayo para filamentos de actina que mide la tasa de polimerización de actina monomérica añadida a los filamentos cortados por gelsolina. Se utilizaron filamentos de actina estabilizados por faloidina para minimizar la reacción de despolimerización y así simplificar el análisis cinético. Debido a que la actividad de la gelsolina está activada por Ca(2+), los experimentos se realizaron en presencia de 0.5 mM de CaCl2 para asegurar la máxima actividad. Mostramos que la interacción de la gelsolina con F-actina puede separarse en dos fases cinéticas distintas que corresponden a eventos de unión y corte. Usando un modelo de dos pasos de la actividad de la gelsolina, hemos determinado que la gelsolina se une a F-actina con una constante de velocidad de asociación de 2 x 10(7) M-1 s-1, se disocia con una constante de velocidad en el rango de 0.4-1.2 s-1, y posteriormente corta F-actina estabilizada por faloidina con una constante de velocidad de primer orden de 0.25 s-1. La caracterización de las reacciones de unión y corte facilitará una mayor investigación sobre la actividad de la gelsolina y su regulación.