2‐DE con IPGs

Con el fin de superar las limitaciones de los gradientes de pH generados por electrólitos portadores, se desarrollaron los IPGs a finales de la década de 1970. Sin embargo, el patrón de 2-DE que incluimos en la primera publicación sobre IEF con IPGs, Bjellqvist et al., J. Biochem. Biophys. Methods 1982, 6, 317-339, estaba lejos de ser competitivo con el 2-DE de alta resolución de O'Farrell utilizando electrólitos portadores. Nuestro patrón de 2-DE en este artículo fue, más o menos, solo una prueba de principio. Sin embargo, fue el comienzo de un largo viaje de protocolos de 2-DE mejorados paso a paso que desarrollamos en nuestro laboratorio y que se resumieron en las revisiones publicadas en Electrophoresis 1988, 9, 531-546 y en Electrophoresis 2000, 21, 1037-1053. Los hitos fueron el diseño de la tira de IPG y el "protocolo de equilibración de reducción-alquilación" de tiras de IPG después de IEF para la transferencia eficiente de proteínas de la primera a la segunda dimensión. El protocolo de 2-DE con IPGs ha sido constantemente refinado, por ejemplo, mediante la generación de IPGs a medida con diferentes intervalos de pH desde los extremos ácidos hasta los básicos (pH 2.5-12) y distancias de separación extendidas para mejorar la resolución. En la presente revisión, se dará un esbozo histórico desde las dificultades técnicas encontradas durante el desarrollo de 2-DE con IPGs, hasta el establecimiento del "protocolo estándar" actual, así como los procedimientos modificados para la separación de proteínas muy ácidas, muy alcalinas, de baja abundancia y hidrofóbicas, seguido de una breve discusión sobre las ventajas y desafíos técnicos de las tecnologías proteómicas basadas en gel.