Análisis cuantitativo de la diferenciación eritroide terminal murina in vivo: método novedoso para estudiar la eritropoyesis normal y desordenada

La diferenciación eritroide terminal es el proceso durante el cual los proeritroblastos se diferencian para producir reticulocitos enucleados. Aunque está bien establecido que durante la eritropoyesis murina in vivo, 1 proeritroblasto sufre 3 mitosis para generar secuencialmente 2 eritroblastos basófilos, 4 eritroblastos policromáticos y 8 eritroblastos ortocromáticos, actualmente no existe un método para monitorizar cuantitativamente este proceso altamente regulado. Aquí describimos un método que distingue cada etapa distinta de la diferenciación eritroide en células de médula ósea y bazo de ratón, basado en los niveles de expresión de TER119, CD44 y el tamaño celular. El análisis cuantitativo reveló que la proporción de proeritroblastos:basófilos:policromáticos:ortocromáticos sigue la proporción esperada de 1:2:4:8, reflejando la progresión fisiológica de la diferenciación eritroide terminal en ratones normales. Además, en 2 modelos de ratón con eritropoyesis de estrés, anemia aguda inducida por flebotomía y anemia hemolítica crónica debido a la deficiencia de 4.1R, la proporción de estas poblaciones de eritroblastos se mantiene igual a la de la médula ósea tipo salvaje. En contraste, en ratones anémicos con β-talassemia intermedia, hay una progresión alterada que se restaura a la normalidad con el tratamiento de transferrina que previamente se había demostrado que mejora el fenotipo anémico. Los medios para cuantificar la eritropoyesis murina in vivo utilizando nuestro enfoque probablemente tendrán una amplia aplicación en el estudio de la eritropoyesis alterada en diversos trastornos de glóbulos rojos.