Clonación molecular y caracterización de una isoforma de la proteína adaptadora Shc de oocitos de Xenopus laevis

Con el fin de obtener una mejor comprensión de la señalización del receptor IGF-1 en oocitos y embriones de Xenopus laevis, hemos llevado a cabo la caracterización de la proteína adaptadora Shc y estudiado su implicación en la maduración de oocitos inducida tras la activación del receptor IGF-1, especialmente dado que la expresión de esta molécula se ha evidenciado indirectamente en oocitos, huevos y embriones de Xenopus. Informamos aquí sobre la clonación de oocitos postvitelogénicos de Xenopus de un ADN complementario que codifica una proteína de 470 aminoácidos que muestra una alta identidad con la proteína adaptadora mamífera p52(ShcA). El análisis de Western blot utilizando anticuerpos homólogos evidenció una proteína de 60 kDa, p60(Xl)(Shc), que se expresa predominantemente en oocitos y en embriones tempranos. También demostramos que, al igual que p60(Xl)(Shc), Grb2 y el factor de intercambio de nucleótidos de guanina Sos se expresan en oocitos a lo largo de la vitelogénesis y en embriones tempranos y que la sobreexpresión de una forma dominante negativa de Grb2 inhibe específicamente la reanudación de la meiosis inducida por insulina. Finalmente, mostramos que Grb2 se une a p60(Shc) en oocitos específicamente tras el tratamiento con insulina. En conjunto, estos resultados sugieren que Shc y Grb2-Sos están implicados en la maduración de oocitos de Xenopus dependiente de ras inducida por insulina/IGF-1; también indican que la incapacidad de la insulina/IGF-1 para activar la cascada Ras-MAPK en oocitos vitelogénicos no resulta de un nivel de expresión insuficiente de Shc, Grb2 y Sos.