Hibridación de colonias: un método para la aislamiento de DNAs clonados que contienen un gen específico.

Se ha desarrollado un método mediante el cual un número muy grande de colonias de Escherichia coli que portan diferentes plásmidos híbridos pueden ser cribadas rápidamente para determinar cuáles plásmidos híbridos contienen una secuencia de ADN o genes específicos. Las colonias a ser cribadas se forman en filtros de nitrocelulosa y, después de que se ha preparado un conjunto de referencia de estas colonias mediante el replanteo, se lisian y su ADN se desnaturaliza y se fija al filtro in situ. Las impresiones de ADN resultantes de las colonias se hibridan luego con un ARN radiactivo que define la secuencia o gen de interés, y el resultado de esta hibridación se analiza mediante autoradiografía. Las colonias cuyos impresiones de ADN exhiben hibridación pueden ser seleccionadas de la placa de referencia. Hemos utilizado este método para aislar clones de plásmidos híbridos ColE1 que contienen los genes de Drosophila melanogaster para los 18 y 28S rARNs. En principio, el método puede ser utilizado para aislar cualquier gen cuya secuencia base esté representada en un ARN disponible.