Optimización Rápida de Parámetros de Instrumentos MRM-MS mediante Alteraciones Sutiles de los Objetivos m/z de Precursores y Productos

La monitorización de reacciones múltiples (MRM) es un método altamente sensible de espectrometría de masas (MS) dirigido que puede ser utilizado para detectar y cuantificar selectivamente péptidos, basándose en el análisis de transiciones especificadas de péptido precursor a ion fragmento. La sensibilidad de MRM-MS depende críticamente de la ajuste de los parámetros del instrumento, como la energía de colisión y el voltaje de cono, para la generación de la señal máxima de ion producto. Aunque existen ecuaciones y valores generalizados para tales parámetros de instrumentos, no hay una indicación clara de que se pueda producir de manera confiable una señal óptima para todos los tipos de transiciones MRM utilizando tal enfoque algorítmico. Para abordar este problema, hemos ideado un flujo de trabajo funcional tanto en el Waters Quattro Premier como en el ABI 4000 QTRAP de cuadrúpolo triple que permite la determinación rápida del valor óptimo de cualquier parámetro programable del instrumento para cada transición MRM. Aquí, demostramos la estrategia para las optimizaciones de energía de colisión y voltaje de cono, pero el método podría aplicarse a otros parámetros del instrumento, como el potencial de desclusterización. El flujo de trabajo utiliza el ajuste incremental de los valores m/z de precursor y producto en el lugar decimal centésimo para crear una serie de objetivos MRM a diferentes energías de colisión que se pueden alternar rápidamente dentro de una sola corrida, evitando cualquier variabilidad de corrida a corrida en la ejecución o comparación. Los resultados son fácilmente visualizados y cuantificados utilizando el paquete de software MRM, Mr. M, para determinar los parámetros óptimos del instrumento para cada transición.