Clonación, estructura y expresión de la citocromo P-450 esteroide 26-hidroxilasa mitocondrial, una enzima biosintética de ácidos biliares

La conversión de colesterilo en ácidos biliares en el hígado representa la principal vía catabólica para la eliminación del colesterol del cuerpo. En esta compleja vía biosintética, al menos 10 enzimas modifican tanto la estructura del anillo como la cadena lateral del colesterol, resultando en la formación de los ácidos biliares primarios, ácido cólico y ácido cenodesoxicólico. Para obtener información sobre los detalles y la regulación de esta vía, hemos utilizado técnicas de secuenciación de proteínas y clonación molecular para aislar y caracterizar un cDNA que codifica para la esteroide 26-hidroxilasa mitocondrial del conejo. Esta enzima cataliza el primer paso en la oxidación de la cadena lateral de intermediarios esteroides en la biosíntesis de ácidos biliares. La estructura de la esteroide 26-hidroxilasa, deducida a partir del análisis de la secuencia de ADN del cDNA y el análisis de la secuencia de proteínas, revela que es un citocromo P-450 mitocondrial. Una secuencia de señal de 36 residuos precede a una región codificante de 499 aminoácidos, prediciendo un peso molecular de 56,657 para la proteína madura. La identidad del cDNA de la 26-hidroxilasa fue confirmada adicionalmente por expresión en células COS de mono empleando un vector de expresión eucariota versátil. Experimentos de blotting revelaron que el ARNm para esta enzima se expresa en muchos tejidos y que está codificado por un gen de bajo número de copias en el genoma del conejo.