Interacción directa de NF-E2 con el sitio hipersensible 2 de la región de control del locus de β-globina en células vivas

La región de control del locus de beta-globina (LCR) humana confiere una expresión específica en tejidos a los genes de beta-globina. Elementos de reconocimiento tandem Maf (MAREs) dentro de la subregión del sitio hipersensible 2 (HS2) del LCR son importantes para la fuerte actividad potenciadora del LCR. Múltiples proteínas son capaces de interactuar con estos sitios in vitro, incluyendo el factor de transcripción específico de células eritroides y megacariocitos, NF-E2. La importancia de NF-E2 para la expresión del gen de beta-globina es evidente en células de eritroleucemia murina que carecen de la subunidad p45 de NF-E2. Estas células CB3 tienen un defecto severo en la transcripción de los genes de alfa- y beta-globina, que puede ser restaurado por la expresión de NF-E2. Sin embargo, los ratones nulos para p45 expresan niveles casi normales de beta-globina. Por lo tanto, existe un factor redundante(s) en los ratones que puede reemplazar funcionalmente a NF-E2, o NF-E2 no funciona a través del LCR para regular la expresión del gen de beta-globina. Para abordar este problema, preguntamos si NF-E2 se une directamente a los MAREs tandem de HS2 en células intactas. Usando un ensayo de inmunoprecipitación de cromatina, proporcionamos evidencia de que NF-E2 se une directa y específicamente a HS2 en células de eritroleucemia vivas y en el hígado fetal de ratón. La inmunoaislación específica de las secuencias de HS2 dependía de la presencia de p45 y de MAREs intactos dentro de HS2. Estos resultados apoyan un papel directo de NF-E2 en la regulación de la expresión del gen de beta-globina a través de la activación del LCR.