Amplificación Isotérmica Mediadas por Bucle de Fluorescencia en Tiempo Real para el Diagnóstico de la Malaria

ANTECEDENTES: Los métodos de diagnóstico molecular pueden complementar las herramientas existentes para mejorar el diagnóstico de malaria. Sin embargo, requieren una buena infraestructura de laboratorio, lo que restringe su uso a laboratorios de referencia y estudios de investigación. Por lo tanto, adoptar herramientas moleculares para usos rutinarios en países endémicos de malaria requerirá plataformas moleculares más simples. El método de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) recientemente desarrollado es relativamente simple y puede mejorarse para un mejor uso en países endémicos. En este estudio, intentamos mejorar este método para el diagnóstico de la malaria utilizando un dispositivo simple y portátil capaz de realizar tanto la amplificación como la detección (por fluorescencia) de LAMP en una sola plataforma. Nos referimos a esto como el método RealAmp. METODOLOGÍA Y HALLAZGOS SIGNIFICATIVOS: Se utilizaron cebadores específicos de género publicados para evaluar la utilidad de este método. Se utilizó ADN derivado de diferentes especies de parásitos de malaria para la caracterización inicial. Se utilizaron muestras clínicas de P. falciparum para determinar la sensibilidad y especificidad de este sistema en comparación con la microscopía y un método PCR anidada. Además, se compararon preparaciones de parásitos hervidos directamente con un método convencional de aislamiento de ADN. Se encontró que el método RealAmp era simple y permitía la detección en tiempo real de la amplificación de ADN. El tiempo de amplificación varió, pero generalmente fue inferior a 60 minutos. Se detectaron todas las especies de Plasmodium que infectan a los humanos. La sensibilidad y especificidad de RealAmp en la detección de P. falciparum fue del 96.7% y 91.7% respectivamente, en comparación con la microscopía y del 98.9% y 100% respectivamente, en comparación con un método estándar de PCR anidada. Además, este método detectó consistentemente P. falciparum a partir de muestras de sangre hervidas directamente. CONCLUSIÓN: Este método RealAmp tiene gran potencial como una herramienta molecular utilizable en campo para el diagnóstico de malaria. Esta herramienta puede proporcionar una alternativa a los métodos de diagnóstico basados en PCR convencionales para su uso en programas clínicos y operacionales en campo.