Evaluación por citometría de flujo de la diferenciación de linfocitos T humanos en el timo y la médula ósea

Usando citometría de flujo multidimensional hemos definido y cuantificado la vía de diferenciación de linfocitos T humanos, centrándonos en aquellos eventos que ocurren entre los timocitos más inmaduros y los presuntos precursores T de médula ósea (BM). Se encontró que los timocitos temprano expresaban el antígeno CD34 y consistían en un 1.2% medio de las células dentro de los timos pediátricos humanos (n = 9) y 2.0% en los timos fetales (n = 4). Todos los timocitos CD34+ eran blastos atípicos por morfología, expresaron CD3 intracitoplasmático, pero no en la superficie celular, y fueron CD2+, CD5+, CD7+, CD38+, CD45+, CD45RA+, CD49d+ y LECAM-1(Leu8)high en la superficie celular. Los timocitos CD34high carecían de expresión superficial de CD4 y CD8, pero a medida que la expresión de CD34 disminuía, había un aumento coordinado en los niveles de CD4, seguido por la aparición de CD8. La expresión de CD1 y CD10 también aumentó concomitantemente con la pérdida de CD34, mientras que la expresión de LECAM-1 disminuyó con la desregulación de CD34. La expresión diferencial de estos antígenos en los timocitos tempranos (así como el número de timocitos que mostraban estos patrones) fue altamente reproducible entre las nueve muestras pediátricas y las cuatro fetales examinadas, sugiriendo una regulación precisa y estereotipada de los eventos de diferenciación temprana. No se identificaron poblaciones celulares con patrones de expresión de antígenos sugerentes de células madre pluripotentes (CD34high, CD38-) o células madre no comprometidas con la línea T (CD34+, CD33+ o CD34+, CD19+) ni en los timos fetales ni en los pediátricos (sensibilidad = 1/10(4)). Se exploró la presencia de células con el perfil antigénico de los primeros timocitos CD34+ en la médula ósea humana. Precursores T de BM presuntos con el fenotipo apropiado (CD34+, CD7+, CD5+, CD2+, LECAM-1high) fueron fácilmente identificados en muestras fetales (constituyendo +/- 2% de la población CD34+), pero no pudieron ser detectados de manera confiable en adultos. A diferencia de los timos, solo el 13% de estas células expresaban CD3 citoplasmático, sugiriendo la presencia del precursor inmediato de la población presunta de protimocitos. Esto fue respaldado además por la detección de células CD34bright, CD7+, CD2-, CD5-, LECAM-1moderadas en muestras fetales. Nuestros resultados documentan el flujo de diferenciación de superficie celular durante la T-linfopoyesis y sugieren que las características de línea T se adquieren primero en la médula ósea. La capacidad de identificar y aislar reproduciblemente poblaciones de precursores de linfocitos T de etapa de maduración precisamente definida en médula ósea y timo mediante citometría de flujo multiparamétrica facilitará la caracterización de los eventos moleculares que controlan la diferenciación de línea T.