Tres RNasas en hojas de trigo senescentes y no senescentes

Hemos descrito tres RNasas en hojas de trigo (Triticum aestivum L. cv Chinese Spring) y desarrollado ensayos para medir cada RNasa individualmente en extractos crudos de hojas. Inicialmente utilizamos la tinción de actividad en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio para caracterizar RNasas en extractos de hojas primarias y bandera. Así identificamos la RNasa ácida (EC 3.1.27.1, designada aquí como RNasa WL(A)), y dos enzimas aparentemente novedosas, designadas como RNasas WL(B) y WL(C). La actividad de la RNasa WL(B) muestra un patrón de isoenzimas distintivo, una masa molecular de 26 kilodaltons (especie mayor), un amplio rango de pH con un óptimo cercano a la neutralidad, insensibilidad a EDTA y estimulación por concentraciones moderadas de KCl y de MgCl(2). La actividad de la RNasa WL(C) presenta una masa molecular de 27 kilodaltons, un óptimo de pH neutro, insensibilidad a EDTA y una inhibición por KCl, MgCl(2) y tri-(hidroximetil)aminometano. Basándonos en propiedades catalíticas distintivas establecidas en geles, diseñamos ensayos en solución convencionales para la cuantificación selectiva de cada actividad de RNasa. Utilizamos los ensayos para monitorear las RNasas individuales después de la cromatografía de filtración en gel y la electroforesis en gel nativo de los extractos. En trabajos acompañantes, utilizamos los ensayos para monitorear las RNasas WL(A), WL(B) y WL(C), que están presentes en hojas senescentes y no senescentes, durante el curso de la senescencia de las hojas.