Detección de la translocación cromosómica t(14;18) dentro de la región del clúster menor del bcl-2 mediante la reacción en cadena de la polimerasa y secuenciación genética directa del ADN amplificado enzimáticamente en linfomas foliculares

Se ha demostrado que la mayoría de las translocaciones t(14;18) se agrupan en uno de dos sitios en el cromosoma 18, llamados la región de ruptura mayor (mbr) o la región de clúster menor (mcr), que se localizan dentro o flanquean el proto-oncogén bcl-2, respectivamente. Hemos determinado la secuencia de nucleótidos de una porción del mcr y construido oligonucleótidos que se utilizaron para realizar la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) junto con cebadores de inmunoglobulina universal para amplificar específicamente los puntos de ruptura t(14;18) en el ADN obtenido de linfomas foliculares. Ocho de diez puntos de ruptura que eran detectables en blots de Southern usando sondas de ADN para el mcr pudieron ser detectados gracias a la amplificación específica mediante la técnica PCR utilizando un cebador específico para el mcr. La secuenciación directa de nucleótidos de los ADN amplificados enzimáticamente mostró que los puntos de ruptura se agruparon dentro de una región de 500 nucleótidos, y cinco ocurrieron dentro de tres nucleótidos entre ellos. Estos datos muestran un notable agrupamiento de algunos puntos de ruptura t(14;18) en un sitio del cromosoma 18, a al menos 30 kb de distancia del gen bcl-2. Nuestros hallazgos también indican que los cebadores específicos para el mcr pueden usarse junto con cebadores específicos para el mbr previamente descritos en una técnica de amplificación de ADN altamente sensible para detectar una gran fracción de puntos de ruptura t(14;18).