Caracterización de la interacción Fas (Apo-1, CD95)-ligando Fas

El receptor de inducción de muerte Fas se activa cuando es entrelazado por la proteína de membrana tipo II ligando Fas (FasL). Cuando el FasL soluble humano (sFasL, que contiene la porción extracelular) se expresó en células de riñón embrionario humano 293, se encontró que los tres glicanos N-enlazados de cada monómero de FasL eran esenciales para una secreción eficiente. Basado en la estructura del complejo receptor I de linfotoxina alfa-factor de necrosis tumoral, se generó un modelo molecular del homotrímero de FasL unido a tres moléculas de Fas utilizando métodos de modelado de proteínas basados en conocimiento. Se introdujeron mutaciones puntuales de residuos de aminoácidos que se predijo afectarían la interacción receptor-ligando en tres sitios. El mutante F275L, que imita la mutación murina gld de pérdida de función, presentó una alta propensión a la agregación y fue incapaz de unirse a Fas. Los mutantes P206R, P206D y P206F mostraron una citotoxicidad reducida hacia las células positivas para Fas con una disminución concomitante en la afinidad de unión a las proteínas de fusión Fc de Fas-inmunoglobulina recombinante. Aunque la actividad citotóxica del mutante Y218D permaneció inalterada, el mutante Y218R fue inactivo, lo que correlaciona con la predicción de que Tyr-218 de FasL interactúa con un grupo de tres cadenas laterales de aminoácidos básicos de Fas. Curiosamente, el mutante Y218F pudo inducir apoptosis en células murinas, pero no en células humanas.