Papel de un sitio de unión a STAT en la regulación del promotor de perforina humana

La proteína formadora de poros perforina se expresa preferentemente en células NK y T citotóxicas. Para investigar la regulación molecular de la transcripción del gen de perforina humana, se analizó la actividad del promotor de perforina humana en líneas celulares de NK y T humanas utilizando varios fragmentos del promotor vinculados a un gen reportero de luciferasa. Se identificó un promotor básico dentro de 55 pb aguas arriba del sitio de inicio de transcripción. Esta región promotora contiene una caja de guanina/citosina y tiene actividad basal en células YT, Kit225-k6, y Jurkat. Se identificó una fuerte actividad potenciadora entre las posiciones -1136 y -1076, una región que incluye un elemento tipo STAT. Esta región potenciadora fue activa en células YT, que tienen expresión constitutiva de perforina y proteína STAT3 activada, pero no en células Kit225-k6 o Jurkat, que no tienen expresión constitutiva de perforina. La mutación del sitio de unión a STAT resultó en una regulación a la baja dramática de la actividad del promotor. Los ensayos de desplazamiento por electroforesis, utilizando una sonda que contiene el elemento STAT del promotor de perforina, indicaron que este elemento puede unir STAT3 de células YT. Además, se demostró que el elemento STAT se une a STAT5a/b inducido por IL-2 así como a STAT1alpha inducido por IL-6 en células NK humanas. En conjunto, estos resultados sugieren que las proteínas STAT desempeñan un papel clave en la transcripción del gen de perforina y proporcionan un modelo mediante el cual las citoquinas pueden regular la expresión del gen de perforina.