Estudios de RMN de 1H sobre la unión de histidina, tirosina y fenilalanina en plasma sanguíneo

La unión de histidina (His), fenilalanina (Phe) y tirosina (Tyr) a macromoléculas en plasma sanguíneo y suero ha sido investigada mediante espectroscopía de RMN de 1H de alta resolución. En espectros de pulso simple y eco de spin del suero bovino de control de calidad y plasma humano normal, no hay resonancias en el rango de desplazamiento químico a alta frecuencia de delta = 5.3 ppm cuando se mide en el rango de pH* (lectura del medidor, no corregido por la presencia de 2H2O) de 3 a 8.5. Al acidificar el plasma a un pH* menor de 2.5, se observan resonancias de His y Phe. En plasma de pacientes con enfermedad de Wilson, se ven señales débiles de His y Tyr en espectros de eco de spin a pH* 7.6, pero aumentan en intensidad al acidificarse y aparecen señales de Phe a pH* 1.8. La adición de soluciones estándar que contienen Tyr, His y especialmente Phe y Trp al plasma a pH* neutro resulta en una mala recuperación de su intensidad de señal esperada en los espectros de eco de spin. La adición de 2 M de urea al plasma bovino a pH* 4.5 da lugar a la aparición de señales de Phe. Estos datos son consistentes con Phe y Tyr (y en menor medida His) estando unidos en o a una estructura macromolecular a pH neutro de la cual hay un intercambio relativamente lento con el entorno de solución libre. Experimentos con soluciones modelo sugieren que la albúmina sérica tiene alta capacidad para unir aminoácidos aromáticos (estabilizada por interacciones hidrofóbicas) a pH neutro y esto es responsable de la invisibilidad en RMN de Tyr y Phe en plasma sanguíneo.