Secuenciación de bisulfito de genoma completo sin amplificación mediante etiquetado con adaptadores posterior al bisulfito

La metilación del ADN juega un papel clave en la regulación epigenética de los genomas eucarióticos. Por lo tanto, la distribución a nivel genómico de 5-metilcitosina, o el metiloma, ha estado atrayendo intensa atención. En los últimos años, la secuenciación de bisulfito de genoma completo (WGBS) ha permitido el análisis del metiloma con resolución de una sola base. Sin embargo, WGBS típicamente requiere cantidades de ADN en microgramos, así como amplificación PCR global, lo que impide su aplicación a muestras de cantidades limitadas. Esto se debe presumiblemente a que el tratamiento con bisulfito de plantillas etiquetadas con adaptadores, que es inherente a los métodos WGBS actuales, conduce a una fragmentación sustancial del ADN. Para eludir la pérdida de plantillas de secuenciación intactas inducidas por el bisulfito, concebimos un método alternativo llamado Etiquetado con Adaptador Posterior al Bisulfito (PBAT) donde el tratamiento con bisulfito precede al etiquetado con adaptadores mediante dos rondas de extensión con primers aleatorios. El método PBAT puede generar un número sustancial de lecturas no amplificadas a partir de cantidades tan pequeñas como subnanogramos de ADN. Solo requiere 100 ng de ADN para WGBS sin amplificación de genomas de mamíferos. Por lo tanto, el método PBAT permitirá diversas aplicaciones novel que, de otro modo, no serían posibles, contribuyendo así al rápidamente creciente campo de la epigenómica.