Integración de Amplificación de Ácidos Nucleicos, Detección y Análisis de Curva de Fusión para la Genotipificación Rápida de Resistencia Antimicrobiana

Para prevenir el uso excesivo de antibióticos y reducir la propagación de la resistencia antimicrobiana (RAM), desarrollamos una prueba genotípica integrada para identificar genes y mutaciones de RAM objetivo con mínima operación del usuario. El sensor de RAM integrado consiste en una cámara de reacción construida sobre un microarray de ADN acoplado por reflexión total interna (TIR), una unidad de gestión de temperatura y un lector de fluorescencia compacto. Al ejecutar un perfil de temperatura programado, el sistema automatizado puede realizar reacciones en cadena de polimerasa asimétricas (PCR) para amplificar múltiples genes objetivo, hibridaciones en microarray para detectar los productos de amplificación y análisis de curva de fusión (MCA) para identificar mutaciones de resistencia. Ocho genes de RAM seleccionados de Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Campylobacter coli y Campylobacter jejuni fueron amplificados utilizando la PCR asimétrica y posteriormente detectados utilizando el microarray acoplado por TIR. La mutación puntual en la región determinante de resistencia a las quinolonas del gen gyrA de Campylobacter jejuni fue estudiada más a fondo realizando MCA en el microarray acoplado por TIR. Los beneficios de un ensayo integrado y rápido, un instrumento compacto y automatizado, y un análisis multiplexado facilitarían las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en el punto de atención para infecciones bacterianas.