Caracterización de anticuerpos específicos para el cap de RNA nuclear pequeño U6. Identificación de la estructura del cap gamma-monometil-GTP en 7SK y varios otros RNA pequeños humanos.

La estructura del cap en el RNA nuclear pequeño (sn) humano U6, guanosina trifosfato gamma-monometil (meGTP), fue conjugada a albúmina sérica humana y utilizada como antígeno para generar anticuerpos policlonales en conejos. Los anticuerpos resultantes reaccionaron específicamente con meGTP pero no con GTP, GDP, GMP, meGMP, meATP, meCTP, meUTP, ni con fosfato metílico en ensayos de inmunosorbente ligado a enzimas y/o en radioinmunoensayos. Aunque de manera menos eficiente, meGDP también fue reconocido por estos anticuerpos. Estudios de inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos anti-meGTP mostraron predominantemente inmunofluorescencia nuclear. Los anticuerpos anti-meGTP inmunoprecipitaron RNA U6 sn intacto de una mezcla de RNAs de células HeLa. Además del RNA U6 sn, los anticuerpos anti-meGTP inmunoprecipitaron varios RNA pequeños adicionales que variaban en longitud de aproximadamente 50 a 330 nucleótidos. Estos RNA contenían la estructura de cap meGTP y son estructuralmente distintos del RNA U6 sn. Uno de estos RNA que contenían meGTP fue identificado como el RNA 7SK previamente caracterizado; el RNA 7SK humano sintetizado in vitro también contenía la misma estructura de cap. Los resultados obtenidos en este estudio proporcionan evidencia de la presencia de la estructura de cap gamma-monometil-GTP en un amplio espectro de RNA celulares humanos. Estos anticuerpos serán útiles en el estudio de la estructura y función de esta nueva familia de RNA pequeños.