Proteína Fibrilar Amiloide Murina: Aislamiento, Purificación y Caracterización

La amiloide murina ha sido producida por cuatro métodos diferentes de inducción (Mycobacterium butyricum, caseína, caseína más el adyuvante de Freund y amiloidosis inducida por endotoxina en ratones) en varias cepas y obtenida de ratones con amiloidosis "espontánea". Las fibrillas amiloides se han concentrado a partir del bazo y el hígado. La microscopía electrónica de todas estas preparaciones revela que la fibrilla amiloide mide 100 Å de ancho y está compuesta por dos filamentos paralelos, cada uno midiendo 35-40 Å de ancho y con la apariencia de una cinta retorcida. La difracción de rayos X de todas las preparaciones revela un espaciado de "espina dorsal" a 4.75 Å y un espaciado de "cadena lateral" a 11 Å indicando una estructura de "hoja en β-plegada". La identificación del componente proteico principal de los concentrados de fibrilla amiloide se realizó mediante el uso combinado de electroforesis en gel de disco de sulfato de sodio de dodecil, marcaje de la proteína con 3 H-Triptófano y filtración en gel de Sepharose 4B. La purificación de la proteína amiloide de hígado de amiloidosis espontánea se llevó a cabo mediante filtración en gel secuencial con 5 M de guanidina en 1 N de ácido acético en columnas de Sepharose 4B y Sephadex G-100 o G-75. El material es una glicoproteína única con un peso molecular de 7200, un alto contenido de aminoácidos dicarboxílicos y de cadena corta, una cantidad significativa de triptófano y un aminoácido terminal NH2 no reactivo, identificado tentativamente como ácido pirrolid-2-ona-5-carboxílico. No hay residuos de metionina, media-cistina, hidroxilisina o hidroxiprolina. Por lo tanto, la proteína amiloide murina presenta similitudes sorprendentes con muchas preparaciones de proteínas amiloides humanas. Se diferencia de las proteínas humanas en la similitud de pesos moleculares de diferentes preparaciones.