Aislamiento y caracterización de mutantes nonsense ámbar letales condicionales del virus de la estomatitis vesicular

Describimos el aislamiento y la caracterización de mutantes nonsense ámbar letales condicionales del virus de la estomatitis vesicular (VSV), serotipo Indiana. Los mutantes fueron aislados de un stock de virus de tipo salvaje mutagénico químicamente por su capacidad de crecer en células genéticamente modificadas que expresan un gen de tRNA de supresor ámbar de Xenopus laevis (células su+) pero no en las células parentales no supresoras (células su-). Se asignaron cinco mutaciones al grupo de complementación I (el gen L) y una al grupo de complementación V (el gen G) mediante un análisis de complementación utilizando mutantes sensibles a la temperatura que representan cada uno de los cinco cistrones de VSV. Se observó que cuatro de los mutantes del grupo I sintetizaban una nueva especie polipeptídica en células su+. Estudios de inmunoprecipitación e inmunoblotting utilizando antisueros monospecíficos dirigidos contra los extremos N y C de la proteína L de VSV mostraron que la nueva especie polipeptídica contiene secuencias específicas del extremo N, pero no secuencias específicas del extremo C, y por lo tanto se pueden considerar versiones truncadas de la proteína L. Además, se pudo identificar una proteína que nuevamente contenía secuencias específicas del extremo N, pero no secuencias específicas del extremo C para el quinto mutante del grupo I. Se aislaron revertantes de cuatro de los mutantes del grupo I en las células su-. Los revertantes sintetizaron proteína L normal pero no la versión truncada supuesta.