Mutantes deficientes en transporte de glucosa de Schizosaccharomyces pombe: fenotipo, genética y uso para complemento genético

Se obtuvieron mutantes deficientes en transporte de glucosa de Schizosaccharomyces pombe mediante el tratamiento de células tipo salvaje (972h-) con N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina, y mediante la selección de los mutantes resultantes en medio de gluconato que contenía 0.05% de 2-deoxi-D-glucosa (2DG). Un mutante, designado YGS-B22, no pudo crecer en D-glucosa y/o D-fructosa como fuente de carbono (Glc/Fru-), y fue resistente a 2DG; por lo tanto, ninguno de los tres azúcares fue captado por las células mutantes. La actividad de hexocinasa en las células tipo salvaje y las células mutantes fue igual. La purificación genética de YGS-B22 mediante retrocruzamiento con un mutante auxotrófico de leucina y el tipo salvaje resultó en dos cepas: YGS-4, con resistencia reducida a 2DG, y YGS-5, que había perdido la resistencia a 2DG. YGS-5 creció en medios que contenían D-glucosa, aunque muy lentamente. No se detectó captación de azúcar medible en ninguno de los dos mutantes dentro del intervalo de prueba de 1 h. El análisis de tétras demostró una segregación mendeliana del crecimiento en D-glucosa y auxotrofía de leucina. Sin embargo, la resistencia a 2DG no co-segregó con el fenotipo Glc/Fru-, lo que indica que la deficiencia de transporte y los caracteres de resistencia a 2DG no están codificados en el mismo locus genómico. Usando un banco genómico de Sch. pombe, se encontraron dos transformantes, YGS-5-G7 y YGS-5-G12, que habían recuperado el crecimiento y el fenotipo de transporte tipo salvaje por complemento. Correspondientemente, tanto la captación de D-glucosa como la acumulación de 2DG fueron restauradas en las cepas transformadas. (RESUMEN TRUNCADO A 250 PALABRAS)