Un sistema simplificado de detección de mutaciones: etiquetado fluorescente multicolor post-PCR y análisis de polimorfismo conformacional de hebra simple por electroforesis capilar

El uso efectivo del conocimiento de las secuencias del genoma humano en estudios de enfermedades hereditarias o cáncer depende en gran medida de métodos eficientes para la detección de mutaciones en muestras individuales. Aquí describimos un sistema de escaneo de mutaciones simple y eficiente en el que los productos de PCR se etiquetan posteriormente con dos tintes fluorescentes diferentes en un solo tubo, y se analizan mediante un sistema automatizado de electroforesis capilar utilizando condiciones de polimorfismo de conformación de hebra simple (PLACE-SSCP). Con el uso adecuado de un control interno de ADN, se evalúan con precisión las diferencias en las mobilidades electroforéticas entre una referencia y las muestras, y luego se juzga estadísticamente la presencia de mutaciones. Se detectaron treinta y tres de 34 mutaciones conocidas en fragmentos de tres contextos de secuencia no relacionados de hasta 741 pb utilizando una condición de electroforesis a un nivel de confianza de <0.3% de falsos positivos. Todas las mutaciones se detectaron analizando a dos temperaturas. El sistema descrito tiene la ventaja de poca intervención humana, corto tiempo de análisis, alta sensibilidad y objetividad en la interpretación de los datos.