Estudio de la fracción de filamentos de 10 nm aislada durante la preparación estándar de microtúbulos

Se han estudiado las fracciones frías no despolimerizables obtenidas durante el procedimiento estándar para la aislamiento de microtúbulos de los hemisferios cerebrales del tallo encefálico de buey y la médula espinal. La preparación de los hemisferios cerebrales estaba compuesta por filamentos de 10 nm pero también contenía grandes cantidades de membranas. El contenido polipeptídico incluía tubulina, proteínas asociadas a microtúbulos y proteínas menores correspondientes al triplete de neurofilamentos de un peso molecular de 210 000, 160 000 y 70 000, respectivamente. La preparación del tallo encefálico contenía más filamentos de 10 nm que membranas. El contenido polipeptídico consistió en el triplete de neurofilamentos (35%), tubulina (30%) y proteínas menores. En contraste, la preparación de la médula espinal estaba principalmente compuesta de filamentos de 10 nm, libres de membranas y conteniendo esencialmente el triplete de proteínas de neurofilamentos (64%). Estos filamentos parecían muy similares a los neurofilamentos del sistema nervioso periférico descritos por varios autores. Dado que el mejor neurofilamento del sistema nervioso central a menudo contenía menos del 15% del triplete de proteínas de neurofilamentos, nuestra preparación de médula espinal es una mejora sobre la preparación usual de neurofilamentos. Este método simple y rápido proporcionó grandes cantidades de filamentos de 10 nm (100 mg por 100 g de médula espinal) caracterizados por la ausencia de material membranoso, un bajo contenido de tubulina y el componente de proteína de 50 000 de peso molecular, y un alto contenido de péptidos de neurofilamento. Por lo tanto, la presencia de tubulina en preparaciones de filamentos de 10 nm parece estar relacionada con el material membranoso contaminante y no estar vinculada a la interacción in vitro de tubulina o microtúbulos con neurofilamentos, como se ha sugerido previamente.