Determinación de la variación genética dentro de Plasmodium falciparum mediante el uso de ADN amplificado enzimáticamente a partir de discos de papel filtro impregnados con sangre entera

Se presenta un nuevo método que permite la amplificación enzimática de ADN extraído de sangre entera seca en discos de papel filtro. El método se utilizó para estudiar la heterogeneidad dentro de un antígeno de unión a eritrocitos (EBA-175) de Plasmodium falciparum. Las muestras de sangre de pacientes infectados con malaria en el sudeste asiático y África se colocaron en papel filtro, se secaron y se transportaron para su procesamiento. El ADN de P. falciparum se extrajo hirviendo los discos de papel filtro en presencia de resina quelante de iones Chelex-100, se amplificó mediante la reacción en cadena de la polimerasa y se analizó en busca de variación genética. En todos los casos examinados, se amplificó y caracterizó con éxito el ADN plasmodial de los discos de papel filtro. La hibridación de los productos de la reacción en cadena de la polimerasa con sondas internas demostró infección simultánea con dos cepas de P. falciparum en dos pacientes. Esta técnica representa un método sensible y práctico de campo para la determinación de variación genética dentro de P. falciparum y el estudio de la epidemiología molecular.