Expresión y caracterización del fragmento N-terminal de la subunidad HsdS de M.EcoR124I

La metiltransferasa de modificación tipo IC M.EcoR124I es una enzima trimérica de 162 kDa que consta de dos copias de la subunidad de modificación, HsdM, y una única subunidad de especificidad de ADN, HsdS. Los estudios hasta la fecha han estado mayormente restringidos a la subunidad HsdM o a la metiltransferasa intacta, ya que la subunidad HsdS es insoluble cuando se expresa independientemente de HsdM. Usando PCR, hemos clonado y expresado 13 fragmentos del gen para la subunidad HsdS, incluyendo las secuencias que codifican cada uno de los dominios variables y conservados y varias combinaciones de estos. Solo se encontró que dos de estos fragmentos eran solubles, un fragmento de 8.6 kDa (S11) que comprende el dominio conservado central y un fragmento N-terminal de 25 kDa (S3) que contiene el dominio variable N-terminal y el dominio conservado central. El análisis del más grande de estos fragmentos por retardación en gel muestra que la proteína se une al ADN en presencia de HsdM en una estequiometría de subunidades de 1:1. La filtración en gel y la espectroscopía de CD indican que la proteína es monomérica y predominantemente alfahelical.