Análisis de N-Glicanos de L-Selectina Recombinante Revela Motivos Sulfatados de GalNAc y GalNAc−GalNAc

El receptor de adhesión leucocitaria L-selectina desempeña un papel crucial en el primer paso de la cascada de adhesión, permitiendo que los leucocitos migren a los tejidos circundantes durante la inflamación y la vigilancia inmunológica. Analizamos la N-glicosilación específica del sitio del dominio de lectina y EGF-like de L-selectina utilizando variantes recombinantes ("LEHis"). Los tres sitios de glicosilación de LEHis se mutaron para obtener variantes glicosiladas individualmente que se expresaron en células HEK293F. La alfa1-glicoproteína ácida (AGP), expresada en el mismo sistema, se utilizó para distinguir entre la glicosilación específica del tipo celular y de la proteína. Utilizando espectrometría de masas y digestiones con exoglicosidasa, establecimos que LEHis llevaba mayormente diantennarios N-glicanos multifucosilados, con una fracción mayor terminando con residuos de GalNAc que reemplazaban el Gal más común. También pudimos mostrar que partes de los residuos de GalNAc estaban sulfatadas. Además, identificamos nuevas estructuras de glicanos diantennarios que terminan con el motivo GalNAc-GalNAc o SO(4)-GalNAc-GalNAc, que aún no han sido descritas para N-glicanos. Curiosamente, ninguna de estas características específicas se encontró en el perfil de N-glicanos de AGP. Esto indica que la información intrínseca de la proteína de L-selectina conduce a la decoración con N-glicanos específicos, lo que a su vez puede estar relacionado con la función de L-selectina.