Clonación y expresión de la isoforma 2 de la ATPasa Ca2+ de la membrana plasmática humana. Propiedades funcionales de la enzima y sus productos de empalme

Se construyeron cDNAs de longitud completa para las tres isoformas 2 (PMCA2) de la bomba Ca2+ de la membrana plasmática humana, empalmadas de manera diferente en el sitio A, y se transfirieron a baculovirus. Las proteínas correspondientes se expresaron tras la infección en células de insecto Sf9. Las proteínas se expresaron a altos niveles y retuvieron las propiedades canónicas de la bomba Ca2+ de la membrana plasmática. El proceso de empalme alternativo no pudo producir diferencias funcionales detectables con los métodos utilizados. La actividad ATPasa dependiente de Ca(2+) de las bombas PMCA2 tenía una afinidad de 5 a 10 veces mayor por la calmodulina que la bomba PMCA4 expresada en el mismo sistema. Experimentos sobre la formación del intermedio fosfoenzima a partir de ATP revelaron que las bombas PMCA2 tenían mayor afinidad por ATP que su contraparte PMCA4. La respuesta de los dos tipos de bomba a los fosfolípidos ácidos activadores fue la misma.