Herencia clonal del patrón de metilación del ADN en células de ratón.

Se utilizó la transferencia genética mediada por ADN para investigar el modo de herencia de la 5-metilcitosina en células L de ratón. El ADN de forma replicativa phi X174 no metilado permanece no metilado después de su introducción e integración en estas células. Por otro lado, el ADN de forma replicativa phi X174 que fue metilado in vitro en sus residuos C-C-G-G retiene estas metilaciones como se demuestra mediante análisis con enzimas de restricción Hpa II y Msp I para detectar metilación en este sitio específico. Aunque estos vectores metilados no seleccionados son propensos a perder el 30-40% de sus grupos metilo tras la transfacción, esta desmetilación parece ser aleatoria. Una vez establecido, el patrón de metilación resultante es estable durante al menos 100 generaciones celulares. Para examinar la especificidad de la herencia de la metilación, se sintetizó in vitro ADN bifuncional phi X174 completamente hemimetilado a partir de ADN de cadena simple phi X174 primado utilizando 5-metil desoxicitidina 5'-trifosfato. Esta molécula se insertó en células L de ratón mediante cotransformación y posteriormente se analizó mediante una serie de enzimas de restricción. Solo se conservaron las metilaciones localizadas en residuos C-G después de muchas generaciones de crecimiento celular. Los resultados sugieren que la herencia del patrón de metilación del ADN celular se basa en una metilasa específica de C-G que actúa sobre ADN hemimetilado recién replicado.