Expresión en Escherichia coli de segmentos de genes de marco de lectura abierta del HTLV-III

El virus linfotrópico humano de células T tipo III (HTLV-III), el agente causante del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), fue aislado recientemente y su estructura genómica analizada mediante métodos de clonación de ADN. En los estudios aquí reportados se utilizó un sistema combinado de clonación y expresión para identificar péptidos codificados por HTLV-III que reaccionan inmunológicamente con anticuerpos en sueros de pacientes con SIDA. El ADN del HTLV-III clonado fue cortado en fragmentos de aproximadamente 500 pares de bases e insertado en un vector de expresión de "marco de lectura abierta", pMR100. El ADN insertado se expresó en transformantes de Escherichia coli como un polipéptido fusionado a la proteína lambda CI en su terminus amino y a la beta-galactosidasa en su terminus carboxilo. Los sueros de pacientes con SIDA que contenían anticuerpos contra HTLV-III fueron utilizados para seleccionar proteínas de fusión inmunorreactivas. Se identificaron veinte clones, cada uno especificando una proteína de fusión que reaccionaba fuertemente con el suero de SIDA. El análisis de la secuencia del ADN indicó que los fragmentos de HTLV-III derivaban de los segmentos de ADN del marco de lectura abierta correspondientes a las regiones codificantes de los genes gag y pol, así como de la gran región de marco de lectura abierta (env-lor) situada cerca del extremo 3' del genoma viral.