Resolución y cuantificación de los moieties de diacilglicerol de glicerofosfolípidos naturales mediante cromatografía líquida de fase reversa con espectrometría de masas de entrada líquida directa

Los moieties de sn-1,2-diacilglicerol de las fosfatidilcolinas naturales como los éteres de trimetilsililo tert-butilado se resolvieron en función de su número de carbono y grado de insaturación mediante cromatografía líquida de alta presión en columnas de fase reversa C 18. Utilizando acetonitrilo y propionitrilo como solventes eluentes y gases reactivos, se encontró que los rendimientos de iones quasi moleculares y fragmentos variaban con el grado de insaturación y distribución posicional de los ácidos grasos en las moléculas de diacilglicerol, y se requerían factores de calibración apropiados para una cuantificación precisa. En ausencia de isómeros estructurales puros y estándares de ácidos mixtos, hemos determinado factores de calibración preliminares para las respuestas de corriente iónica total y específica, comparando las proporciones del área de pico obtenidas mediante cromatografía líquida – espectrometría de masas con las proporciones de peso y moles de especies moleculares que se sabe están presentes en las muestras a partir de análisis detallados mediante cromatografía capilar de gases – líquidos en fases líquidas polares. Se encontró que la respuesta total de corriente de ionización química coincidía estrechamente con la composición en peso de las especies moleculares. Los rendimientos relativos de los iones (MH – 132) + variaron entre uno y tres veces, mientras que los de los iones (MH – RCOOH) + variaron en un rango de tres a cuatro veces de intensidades. Después de una calibración adecuada de la respuesta iónica relativa, fue posible determinar la identidad y cantidad de todas las especies moleculares comunes en los diacilglicerofosfolípidos de prueba. Aunque los factores derivados incluyen efectos cromatográficos y de espectrometría de masas y se obtienen con un gradiente de gases reactivos, parecen ser generalmente aplicables.