Preparación y caracterización del inhibidor tisular recombinante de metaloproteinasa 4 (TIMP-4)

TIMP-4, un nuevo inhibidor tisular humano de metaloproteinasa, fue identificado y clonado (Greene, J., Wang, M., Raymond, L. A., Liu, Y. E., Rosen, C., y Shi, Y. E. (1996) J. Biol. Chem. 271, 30375-30380). En este informe, se describen la producción y caracterización de TIMP-4 recombinante (rTIMP4p). rTIMP4p, expresado en células de insecto infectadas por baculovirus, se purificó hasta obtener homogeneidad mediante una combinación de cromatografía de intercambio catiónico, hidrofóbica y de exclusión por tamaño. La proteína purificada migró como una única banda de 23 kDa en la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS y en Western blot utilizando un anticuerpo anti-TIMP-4 específico. Se demostró la inhibición de las actividades de metaloproteinasa de matriz (MMP) por rTIMP4p en cinco MMPs. Estudios cinéticos enzimáticos revelaron valores de IC50 (concentración al 50% de inhibición) de 19, 3, 45, 8 y 83 nM para MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7 y MMP-9, respectivamente. rTIMP4p purificado demostró un fuerte efecto inhibitoria sobre la invasión de células de cáncer de mama humano a través de membranas basales reconstituidas. Así, TIMP-4 es un nuevo inhibidor enzimático en la degradación de la matriz extracelular mediada por MMP y puede tener potencial terapéutico en el tratamiento de la progresión maligna del cáncer.