Detección del coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio mediante amplificación isotérmica mediada por bucle con transcripción inversa (RT-LAMP)

El primer caso documentado de coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV) ocurrió en 2012 y, desde entonces, los brotes han continuado, principalmente en Arabia Saudita. El MERS-CoV se diagnostica principalmente mediante un ensayo de RT-PCR en tiempo real, requiriéndose al menos dos dianas genómicas diferentes para un diagnóstico positivo según la definición de caso de la Organización Mundial de la Salud (WHO) a fecha de 3 de julio de 2013. Por lo tanto, es urgentemente necesario desarrollar tantos métodos de diagnóstico genético específicos como sea posible para permitir un diagnóstico estable de las infecciones por MERS-CoV. La amplificación isotérmica mediada por bucle con transcripción inversa (RT-LAMP) es un método de diagnóstico genético ampliamente utilizado para la detección de patógenos virales, que requiere únicamente una sola temperatura para la amplificación y puede completarse en menos de 1 h. En este estudio se desarrolló un nuevo ensayo de RT-LAMP para detectar el MERS-CoV utilizando conjuntos de cebadores dirigidos a una región conservada de la proteína de la nucleocápside. El ensayo de RT-LAMP fue capaz de detectar tan solo 3.4 copias de ARN de MERS-CoV y fue altamente específico, sin reacción cruzada con otros virus respiratorios. También se realizaron experimentos piloto para detectar MERS-CoV a partir de medio que contenía hisopados faríngeos inoculados con virus previamente titulados. El ensayo de RT-LAMP mostró una sensibilidad similar a la de la RT-PCR en tiempo real para MERS-CoV. Estos resultados sugieren que el ensayo de RT-LAMP aquí descrito es una herramienta útil para el diagnóstico y la vigilancia epidemiológica de las infecciones humanas por MERS-CoV.