Inhibidor del activador del plasminógeno 1: desarrollo de un radioinmunoensayo y observaciones sobre su concentración plasmática durante la oclusión venosa y después de la agregación plaquetaria

Para estudiar el efecto de los inhibidores del activador del plasminógeno (PAI) sobre la fibrólisis, es esencial poder medir específicamente estas proteínas en plasma. Con este fin, se purificó PAI-1 a partir de células de fibrosarcoma HT 1080 estimuladas por cortisol y se generaron antisueros en conejos. La relación inmunológica del inhibidor purificado con PAI-1 en plasma y extractos plaquetarios se estableció mediante inmunoblotting y zimografía de fibrina regular y reversa. Además, el producto purificado pudo ser inmunoprecipitado con anticuerpos contra PAI-1 derivado de células endoteliales humanas o bovinas. Se desarrolló un radioinmunoensayo que mide tanto PAI-1 libre como PAI-1 unido al activador del plasminógeno tipo tejido (t-PA) en plasma y tiene un rango efectivo de 8 a 250 ng/mL. Los niveles de antígeno PAI-1 mostraron un aumento de dos veces después de 20 minutos de oclusión venosa, parcialmente debido a hemoconcentración. Aproximadamente una cuarta parte de PAI-1 antes y después de la oclusión venosa se deriva de las plaquetas. Después de corregir por hemoconcentración y la contribución de las plaquetas a los niveles de PAI-1 en plasma, se observó un aumento aún significativo en los niveles de PAI-1 durante la oclusión venosa, lo que sugiere que el lecho vascular local libera PAI-1. Concomitantemente con PAI-1, los niveles de antígeno t-PA aumentaron ocho veces y la actividad fibrinolítica 18 veces después de 20 minutos de oclusión venosa. Los niveles de PAI-1 y t-PA tienden a aumentar con la edad: en un grupo de voluntarios mayores sanos (edad media, 53 años), los niveles de PAI-1 eran el doble y los niveles de t-PA 1.7 veces más altos que los de un grupo con una edad media de 29 años. La determinación de los niveles de antígeno PAI-1 antes y después de la agregación plaquetaria demostró que el 85% de PAI-1 en plasma rico en plaquetas está asociado con plaquetas. La cantidad promedio de PAI-1 por plaqueta fue de 0.3 fg/plaqueta, es decir, 4,000 moléculas por plaqueta.