Efectos duales de la ouabaína en la regulación de la proliferación y apoptosis en células de músculo liso prostático humano

OBJETIVO: Elucidar el papel de la ouabaína en la fisiopatología de la hiperplasia prostática benigna examinamos los efectos de la ouabaína sobre la proliferación y apoptosis de células de músculo liso prostático humano. MATERIALES Y MÉTODOS: Se obtuvieron cultivos primarios de células de músculo liso prostático humano de 7 pacientes con obstrucción del tracto urinario inferior causada por agrandamiento prostático benigno. Se realizó un estudio de proliferación celular utilizando el método de ensayo de 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazolium bromuro para examinar los efectos de diferentes concentraciones de ouabaína y varios inhibidores. Se realizó un análisis de Western blot para determinar la activación de la quinasa activada por mitógenos (MAPK). También se llevaron a cabo la técnica de reacción de rotulado terminal con transferencia de desoxinucleotidil mediada por desoxiuridina trifosfato y un ensayo de actividad de caspasa-3 para examinar el mecanismo apoptótico. RESULTADOS: La ouabaína mostró un efecto proliferativo modesto pero significativo en concentraciones nanomolares; mientras que indujo la apoptosis celular a concentraciones más altas. La ouabaína causó una activación rápida de las MAPKs p42/44. El efecto proliferativo de la ouabaína fue completamente atenuado por W-7 y el inhibidor de la quinasa MAPK (MEK), lo que sugiere la necesidad de movilización de Ca(2+) y la implicación de la cascada MEK-p42/44 MAPK. El efecto citotóxico de la ouabaína se definió como apoptosis y necrosis utilizando la técnica de reacción de rotulado terminal con transferencia de desoxinucleotidil mediada por desoxiuridina trifosfato y un ensayo de liberación de lactato deshidrogenasa, respectivamente. Además, la ouabaína indujo una actividad de caspasa-3 profunda en las concentraciones citotóxicas y el DEVD-CHO invirtió la acción citotóxica de la ouabaína, demostrando la implicación de la activación de caspasa-3 en la acción citotóxica. CONCLUSIONES: La ouabaína a diferentes concentraciones provocó efectos duales en la proliferación y apoptosis en células de músculo liso prostático humano. A bajas concentraciones, la ouabaína promovió la proliferación celular a través de un mecanismo dependiente de Ca(2+) y la activación de la vía MEK-p42/44 MAPK; mientras que indujo la apoptosis celular a través de la activación de la actividad de caspasa-3 a concentraciones más altas.