Caracterización bioquímica y molecular de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NAD+ de la quimiolitoautótrofa Acidithiobacillus thiooxidans

Se purificó y caracterizó una isocitrato deshidrogenasa (ICDH) con una especificidad de coenzima única de Acidithiobacillus thiooxidans, y se clonó su gen. La enzima nativa era homodimérica con una subunidad de M(r) 45000 y mostraba una preferencia 78 veces mayor por NAD(+) sobre NADP(+). El gen ICDH clonado (icd) se expresó en una cepa deficiente en icd de Escherichia coli EB106; se encontró actividad en el extracto celular. El gen codifica un polipéptido de 429 aminoácidos y se encuentra entre marcos de lectura abiertos que codifican un gen putativo de aconitasa (río arriba de icd) y un gen putativo de la subunidad beta de la succinil-CoA sintasa (río abajo de icd). La ICDH de A. thiooxidans mostró una alta similitud de secuencia con la ICDH bacteriana dependiente de NADP(+) en lugar de la ICDH eucariota dependiente de NAD(+), pero se sugirió que la preferencia por NAD(+) de la enzima se debía a residuos conservados en el sitio de unión de coenzimas de la deshidrogenasa descarboxilante dependiente de NAD(+).