Smad3 fosforilado constitutivamente interactúa con Sp1 y p300 en fibroblastos de esclerodermia

OBJETIVO: Elucidar el papel de la señalización del factor de crecimiento transformante-beta (TGF-beta)/Smad en la expresión aumentada del gen del colágeno en fibroblastos de esclerosis sistémica (SSc). MÉTODOS: Se estudiaron fibroblastos dérmicos de siete pacientes con SSc difusa de inicio reciente y de siete individuos sanos. Los niveles de expresión de las proteínas Smad2, Smad3 y Smad4 se determinaron mediante inmunoblotting. La fosforilación de Smad3 y la interacción de Smad3 con Sp1 o p300 se analizaron mediante inmunoprecipitación. Los efectos de la sobreexpresión de las proteínas Smad o Sp1 en la transcripción del gen del colágeno humano alfa2(I) se investigaron con ensayos de acetiltransferasa de cloranfenicol (CAT) utilizando el constructo -772 COL1A2/CAT. RESULTADOS: Se detectó una fosforilación de Smad3 aumentada de forma constitutiva en fibroblastos de SSc en comparación con fibroblastos normales. También se detectó una interacción aumentada de Smad3 con Sp1 así como p300 en fibroblastos de SSc. La sobreexpresión de Smad3 provocó un aumento de hasta 5 veces en la actividad del promotor de COL1A2 en fibroblastos normales, mientras que Smad3 causó un pequeño aumento en la actividad del promotor de COL1A2 en fibroblastos de SSc. Sin embargo, ni Smad2 ni Smad4 causaron efectos significativos en la actividad del promotor de COL1A2 en fibroblastos normales o fibroblastos de SSc. La sobreexpresión de Sp1 causó un mayor aumento en la actividad del promotor de COL1A2 estimulado por TGF-beta en fibroblastos normales, pero no cambió la actividad del promotor de COL1A2 en presencia de TGF-beta en fibroblastos de SSc. La sobreexpresión combinada de Smad3 y Sp1 mejoró significativamente la respuesta a TGF-beta en fibroblastos normales, pero de manera menos marcada en fibroblastos de SSc. CONCLUSIONES: Estos resultados sugieren que los fibroblastos de SSc son menos sensibles a la estimulación exógena de TGF-beta porque ya están activados por el bucle autócrino de TGF-beta.