La eficiencia de la inserción de selenocisteína de Escherichia coli está influenciada por el nucleótido inmediato aguas abajo.

La incorporación de selenocisteína (Sec) requiere el codón de opal TGA y una secuencia de inserción de Sec aguas abajo (SECIS), que puede ser parcialmente aleatorizada y clonada en construcciones de fusión M13 pIII para la visualización en fagos. Este enfoque combinatorio proporciona un ensayo conveniente no radiactivo que acopla la producción de fagos a la supresión de opal. Se prepararon dos bibliotecas de SECIS, con el nucleótido inmediato aguas abajo aleatorizado (TGAN) o fijado como timidina (TGAT). La biblioteca TGAN dio como resultado una mayoría de clones con una purina aguas abajo y producción de fagos independiente de selenio, implicando la vía endógena de supresión de opal que inserta triptófano. Aunque la adición de selenito de sodio al medio de crecimiento no afectó la producción de fagos, sí aumentó el nivel de inserción de Sec, como se mostró por la reactividad química del fago resultante. La biblioteca de fagos TGAT produjo clones con producción de fagos estrictamente dependiente de selenio y reactividad consistente con la presencia de Sec. Sin embargo, estos clones eran propensos a mutaciones espontáneas tras una mayor propagación, lo que resultó en la pérdida del fenotipo dependiente de selenio. Concluimos que el nucleótido inmediato aguas abajo determina si la vía endógena de supresión de opal compite con la inserción co-traducional de Sec.