Componentes de unión a progesterona del oviducto de pollo

Resumen La inducción de la síntesis de la proteína específica avidina por una única administración de progesterona ha sido demostrada previamente en pollitos in vivo y en tejidos triturados y cultivos de monocapa del oviducto de pollo. Para investigar el mecanismo de inducción, se aislaron y caracterizaron componentes macromoleculares del citoplasma del oviducto que se unen a 3H-progesterona in vitro mediante centrifugación en gradiente de sacarosa, electroforesis en gel de poliacrilamida, digestión enzimática y filtración en gel sobre agarosa (Bio-Rad Laboratories, Richmond, California). El esteroide radiactivo en el complejo aislado fue identificado como progesterona, no un metabolito, mediante cromatografía en papel. La interacción con 3H-progesterona tiene una constante de disociación aparente kd ≃ 8 x 10-10 m en 0.3 m KCl a 1° y se revierte por calefacción suave y por progesterona no etiquetada g testosterona g 20α-hidroxi-4-pregnene-3-ona g 17β-estradiol g cortisol g estrona g androstenediona. La participación de la proteína en el sitio de unión del esteroide se infirió de la destrucción del complejo por 10-3 m p-hidroxi-mercuribenzoato y por Pronase, pero no por ribo- o desoxirribonucleasas. El número y tamaño aparente de los componentes de unión citoplasmáticos varían con la concentración de KCl y la técnica de aislamiento y detección. En ausencia de KCl, los componentes principales se caracterizan por coeficientes de sedimentación, s020,w, de aproximadamente 5 S y 8 S, pesos moleculares de aproximadamente 1.0 y 3.6 x 105 (estimados a partir de la variación de la movilidad electroforética con la concentración de gel), y radios efectivos lo suficientemente grandes como para ser eluidos en, o cerca, del volumen de vacío de columnas de Agarosa A-0.5m. En las mismas condiciones, la globulina de unión a corticosteroides (CBG) del plasma de pollo se comporta como un único componente con s020,w ≃ 3.7 S y peso molecular ≃ 6.0 x 104. En soluciones que contienen 0.3 m KCl, los componentes citoplasmáticos y la CBG sedimentan a aproximadamente la misma velocidad pero pueden distinguirse entre sí por los coeficientes de distribución en Agarosa A-0.5m. De estos resultados, se pueden calcular radios de Stokes moleculares de 55 y 63 A para los componentes citoplasmáticos, comparados con 37 A para la CBG. Los componentes de unión a progesterona del citoplasma del oviducto de pollo son, por tanto, distinguibles de la CBG por todos los métodos fisicoquímicos probados. Un papel funcional para estos componentes en la inducción de la síntesis de avidina por progesterona está respaldado por (a) el orden paralelo de efectividad de varios esteroides en competir con la unión a la progesterona y en potencia como inductores, y (b) los efectos análogos de tratar a los pollitos con dietilestilbestrol en la actividad de unión a la progesterona y en la inducción de avidina.