Purificación de topoisomerasa II de células de leucemia P388 resistentes a amsacrina. Evidencia de dos formas de la enzima.

La topoisomerasa II fue purificada de un mutante resistente a amsacrina de P388 leucemia. Se ha desarrollado un procedimiento que permite la purificación rápida de enzima casi homogénea en cantidades suficientes para estudios enzimáticos o producción de antisueros específicos. La topoisomerasa II purificada migró en electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio como dos bandas con masas moleculares aparentes de 180 (p180) y 170 kDa (p170); ambas proteínas desenlazaron ADN P4 de manera dependiente de ATP y mostraron un acoplamiento covalente estimulado por amsacrina al ADN. Los patrones de fragmentación de la proteasa Staphylococcus V8 de p170 y p180 mostraron diferencias distintas. Anticuerpos policlonales específicos contra p170 o p180 reconocieron de manera muy selectiva la forma de la enzima utilizada para generar los anticuerpos. La inmunoblotting con estos anticuerpos específicos mostró que tanto p180 como p170 estaban presentes en células lisadas inmediatamente en dodecil sulfato de sodio hirviendo. La comparación de la topoisomerasa II purificada de P388 resistente a amsacrina con la de P388 sensible a amsacrina demostró que cada tipo celular contenía tanto p180 como p170; sin embargo, las cantidades relativas de las dos proteínas eran consistentemente diferentes en los dos tipos celulares. Los datos sugieren fuertemente que p170 no es un fragmento proteolítico de p180. Así, las células P388 parecen contener dos formas distintas de topoisomerasa II.