Reevaluación del número de genes auxiliares esenciales para la expresión de resistencia a meticilina de alto nivel en Staphylococcus aureus

Una nueva biblioteca de transposones construida en el fondo de la cepa COL de Staphylococcus aureus altamente y homogéneamente resistente a meticilina produjo 70 mutantes de inserción independientes con niveles reducidos de resistencia a antibióticos. El análisis de restricción con HindIII, EcoRV, EcoRI y PstI, seguido de la hibridación de Southern con sondas para el transposón y para el gen femA-femB, demostró que 41 de los 70 mutantes Tn551 presentaban sitios de inserción distintos y novedosos, que aún no se han descrito, todos los cuales estaban fuera del gen mecA y también fuera de los genes auxiliares ya caracterizados femA, femB, femC y femD. Todas las mutaciones Tn551 descritas previamente de este tipo estaban en genes ubicados ya sea en el fragmento A de SmaI o en el fragmento I de SmaI. En contraste, las inserciones de la nueva biblioteca se localizaron en 7 de los 16 fragmentos cromosómicos de SmaI, los fragmentos A, B, C, D, E, F e I. En todos los mutantes, la expresión de resistencia a meticilina se volvió heterogénea, y la CIM para la mayoría de las células se redujo (1.5 a 200 microgramos ml-1) respecto a la CIM homogénea de meticilina (1,600 microgramos ml-1) de las células parentales. Aunque la identificación del número exacto de genes inactivados a través del nuevo conjunto de inserciones de transposones requerirá clonado y secuenciación, una estimación aproximada de este número a partir de los datos de mapeo sugiere un mínimo de al menos 10 a 12 nuevos determinantes genéticos, todos los cuales son necesarios junto con femA, femB, femC y femD para la expresión óptima de resistencia a meticilina.