Inhibición de la subunidad catalítica de la quinasa de fosforilasa por sus subunidades alfa/beta.

Las subunidades de la quinasa de fosforilasa se separan y aíslan en alto rendimiento mediante cromatografía de filtración en gel en un tampón fosfato de pH 3.3 que contiene 8 M de urea. Se obtienen tres picos de proteína: las subunidades alfa y beta coeluyen en el primero, mientras que las subunidades gamma y delta son picos separados. Al diluir el desnaturalizante, la actividad catalítica reaparece, asociada solo con la subunidad gamma. Como se ha observado anteriormente (Kee, S.M., y Graves, D.J. (1986) J. Biol. Chem. 261, 4732-4737), la adición de calmodulina estimula dramáticamente la reactivación de gamma. La inclusión de cantidades crecientes de la mezcla de subunidades alfa/beta en la renaturalización disminuye progresivamente la actividad de la gamma renaturalizada o gamma-calmodulina. Esta inhibición por alfa/beta se debe probablemente a interacciones específicas con la subunidad gamma porque la inhibición es menor a pH 8.2 que a pH 6.8 y menor cuando se utilizan cantidades equivalentes de subunidades alfa/beta fosforiladas (se sabe que tanto el pH alcalino como la fosforilación estimulan la actividad del holoenzima). Estos resultados sugieren que el papel de las subunidades alfa o beta, o quizás ambas, en el complejo no activado (alfa 2 beta 2 gamma 2 delta 2)2 de la quinasa de fosforilasa es suprimir la actividad de la subunidad gamma y que la activación de la enzima, por fosforilación por ejemplo, se debe a la desinhibición causada por la liberación de esta restricción cuaternaria por alfa y/o beta sobre gamma.