Almacenamiento en seco a largo plazo de un sistema de reactivos basado en enzimas para ELISA en dispositivos de punto de atención

Los dispositivos de flujo lateral se utilizan comúnmente para muchas aplicaciones de punto de atención (POC) en entornos de bajos recursos. Sin embargo, carecen de la sensibilidad necesaria para muchos analitos relevantes en el diagnóstico de enfermedades. Un enfoque para lograr una mayor sensibilidad es la amplificación de señales, que se utiliza comúnmente en análisis de laboratorio, pero usa reactivos que requieren refrigeración y, por lo tanto, requiere múltiples pasos de análisis que normalmente no son compatibles con entornos POC. La amplificación de señales basada en enzimas, como la que se utiliza en ELISA, podría mejorar significativamente el límite de detección si se tradujera a un formato compatible con los requisitos POC. Un dispositivo POC con amplificación de señal no solo requiere que los reactivos se almacenen en una forma estable, sino que también requiere la automatización de los múltiples pasos secuenciales de los protocolos de amplificación de señales. Aquí, describimos un método para el almacenamiento en seco a largo plazo de reactivos de ELISA: anticuerpo marcado con peroxidasa de rábano picante (HRP) y su sustrato colorimétrico diaminobenzidina (DAB). El conjugado de HRP retuvo aproximadamente el 80% de la actividad enzimática después del almacenamiento en seco a 45 °C durante más de 5 meses. El sustrato DAB también fue estable a 45 °C y no mostró pérdida detectable de actividad durante 3 meses. Estos reactivos se incorporaron en un dispositivo de red de papel bidimensional (2DPN) que automatizó los pasos de ELISA para la detección de un biomarcador de malaria. Estos resultados demuestran el potencial de la amplificación de señales basada en enzimas para mejorar la sensibilidad en dispositivos POC para entornos de bajos recursos.