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La mutagénesis dirigida por sitio de plásmidos completos es una forma sencilla de crear variaciones ligeramente diferentes de un plásmido original. Con este método, el gen objetivo clonado puede ser alterado mediante sustitución, eliminación o inserción de unas pocas bases directamente en un plásmido. Funciona amplificando simplemente el plásmido completo, en una reacción de termociclado no basada en PCR. Durante la reacción, los cebadores mutagénicos, que llevan la mutación deseada, se integran en el plásmido recién sintetizado. En este tutorial en video demostramos una forma fácil y rentable de introducir sustituciones de bases en un plásmido. El protocolo funciona con reactivos estándar y es independiente de kits comerciales, que a menudo son muy costosos. Aplicar este protocolo puede reducir el costo total de una reacción a una octava parte de lo que cuesta utilizando algunos de los kits comerciales. En este video también comentamos sobre pasos críticos durante el proceso y damos instrucciones detalladas sobre cómo diseñar los cebadores mutagénicos.
Laible et al. (Mon,) estudiaron esta cuestión.